刘明杨晓岗马波陈丽
基金项目：国家自然科学基金项目（编号：）；陕西省重点研发计划项目（编号：SYFYBSF）；西安市科技计划项目［编号：05097YX5SD31(5)］；西安交通大医院基金项目（编号：MS34）
作者单位：陕西省西安市，医院眼科，陕西省眼科研究所（刘明，杨晓岗）；陕西省西安市，西安交通大医院眼科（马波，陈丽）
目的观察氧化应激对视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium，RPE)细胞的损伤作用以及对骨形态发生蛋白(bonemorphogeneticprotein，BMP)-6及其相关受体的影响。方法RPE细胞随机分为对照组：正常培养的RPE细胞；H2O2组：加入μmol·L-1H2O2处理的RPE细胞；实验组：加入umol·L-1H2O2和0.1mol·L-1BMP-6的RPE细胞。采用活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)检测试剂盒运用流式细胞仪检测对照组与H2O2组RPE细胞内ROS的变化，运用PCR及Westernblot法检查对照组与H2O2组BMP-6基因及蛋白水平的变化TUNEL染色法观察三组细胞凋亡的变化，并运用PCR及Westernblot法观察三组BMP受体及其共受体尤文素(Hemojuvelin，HJV)的变化。结果H2O2组ROS水平(99.25±0.28)%较对照组(70.55±7.71)%明显升高，差异有统计学意义(P0.05)；H2O2组相对于对照组BMP-6mRNA水平及BMP-6蛋白水平均降低，差异均有统计学意义(均为P0.05)；H2O2组的TUNEL染色阳性细胞数显著高于对照组(P0.05)，而实验组TUNEL染色阳性细胞数明显减少，与H2O2组相比，差异有统计学意义(P0.05)；与对照组相比，H2O2组BMP三种相关受体的BMPRIA、BMPRIB及HJV的表达水平显著降低，而实验组三种受体表达水平较H2O2组显著升高，差异均有统计学意义(均为P0.05)。结论H2O2导致RPE细胞ROS增加，氧化应激可在基因及蛋白水平抑制BMP-6的表达；BMP-6可减轻氧化应激引起的细胞凋亡，且可能是通过激活其相关受体起作用的，这为探索年龄相关性*斑变性的发病机制提供了一定的理论基础。
骨形态发生蛋白；氧化应激；视网膜色素上皮细胞；年龄相关性*斑变性
R
年龄相关性*斑变性(age-relatedmaculardegeneration，AMD)是50岁以上人群视力丧失的重要原因，已成为全球失明的主要原因之一，因此，AMD的防治具有举足轻重的意义[1]。目前认为，AMD的发病机制是由于氧化应激、细胞老化、炎症等因素综合作用所致的，而氧化应激可能是各种因素的共同作用机制[2]。视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium，RPE)细胞是位于视网膜最外层的单细胞层，在AMD的发病机制中起着重要作用，是其发病的中心环节[3]。有研究证明，铁代谢异常与AMD的发病密切相关[4]。而在肝脏中，骨形态发生蛋白(bonemorphogeneticprotein，BMP)-6可调节铁调素进而维持铁的平衡[5]。这些研究均提示，BMP-6可能与AMD的发病有关，在保护RPE细胞方面可能发挥着重要的调控作用。此外，我们既往研究发现，H2O2可引起RPE细胞铁调素水平的下降[6]，而BMP-6是调节铁调素的关键因子[5]。因此，本研究利用细胞培养和分子生物学等技术，在细胞层面观察氧化应激对RPE细胞的损伤作用和对BMP-6及其相关受体的影响，探讨RPE细胞氧化应激损伤的分子机制，为AMD的防治寻找新的靶点。
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